血球計数器の細胞計数手順

血球計数器の細胞計数手順

血球計数器の機能を理解する

血球計数器は 19 世紀初頭から存在しており、医療目的で血球を正確に数えるように設計されていました。この技術は、生体サンプル中の細胞成分を定量化するための標準化された信頼性の高い方法を提供することにより、血液学の分野に革命をもたらしました。血球計数器は、物理学、化学、生物学の原理を組み合わせた、さまざまな科学分野の革新的な概念を採用しています。表面張力を利用することにより、細胞は血球計数器の計数領域全体に均一に分布し、代表的なサンプリングが保証されます。このデバイスには、通常はガラス表面にエッチングされたグリッド パターンが組み込まれており、細胞濃度と密度の正確な測定が可能になります。これにより、研究者や臨床医は、赤血球数や白血球数、血小板レベル、細胞形態などのさまざまなパラメーターを分析することで個人の健康状態を評価できます。さらに、血球計算により得られた結果の統計的有意性は、正確な結論を引き出す上で重要な役割を果たします。血球計数器の使用は血液分析を超えて拡大し、微生物学、獣医学、産業研究などのさまざまな分野で応用が見出されています。これは、科学的調査および医療診断における基本的なツールとしての血球計算法の多用途性と永続的な関連性を強調しています。
図: 血球計数グリッド。

血球計算板の原理

血球計数器は、細胞の計数と細胞密度の測定に不可欠なツールであり、9 つの 1 x 1 mm (1mm2) セクターを区切る慎重にエッチングされたライン以上のものを提供します。さらに高い精度を提供するために、各セクターは、使用されている血球計数器の特定のバージョンに応じて、同じサイズの 16 または 25 の小さな正方形にさらに分割されます。これらの小さな正方形は、分析対象の細胞の一貫した分布を保証するグリッド パターンを作成することにより、正確な計数を容易にします。
計数プロセス中、特別に設計されたスライドがチャンバーの上部に配置され、チャンバーの表面とスライドの底の間に 0.1 mm の狭い隙間が残ります。この意図的な間隔は、分析用の既知のボリュームを確立するという重要な目的を果たします。チャンバーとギャップの寸法を考慮することで、正確な体積 0.1 mm3 (1E-4 mL に相当) が得られます。
細胞がチャンバーに導入されると、細胞は自然にギャップ内の利用可能なスペースを占有します。したがって、各 1mm2 セクター内の目に見える細胞は、1E-4 mL の体積内に存在する細胞集団を表します。この独創的な設計により、研究者や科学者は小規模で細胞密度を推定し、1 ミリリットルあたりの細胞数 (細胞/mL) を定量化できます。


シンプルなイラスト

4x1mm2 セクター内のセルをカウントすると、次のカウント 31、25、40、33 が得られます。平均すると、1mm2 あたり 32.25 セルになります。面積が 1E-4 mL の体積に相当することがわかっているため、1E-4 mL には 32.25 個の細胞が存在し、密度は 322,500 細胞/mL になります。式は関係ありません。血球計の寸法に基づいて細胞密度を推定するだけです。これを一般的なケースに拡張すると、式は細胞密度 = (カウントされた細胞の総数 / カウントされた正方形の数) / 1 つの正方形の体積になります。これには、実行された希釈は考慮されていません。
1mm2 の正方形の場合、1 つの正方形の体積は 1E-4 ですが、細胞を数えるために選択した正方形のサイズによっては、これが異なる場合があります。たとえば、中央の正方形内の小さな正方形は、赤血球の数をカウントするために使用されます。その場合、正方形の体積は 1E-4 mL / 25 (1mm2 の中央の正方形に 25 個の小さな正方形があります) となり、4E-6 mL の小さな正方形の体積になります。


細胞生存数

血球計数から得られる特に有用な指標がもう 1 つあります。それは生存率です。生存率は、培養中のすべての細胞のうちの生細胞の量の尺度を与えます。これは、生細胞ではなく死細胞を染色する色素を計数溶液に添加することによって測定できます。これらの色素は計数中に個別に記録され、生存率は生細胞 / 総細胞 (パーセント) として計算されます。


血球計数から得られる測定値の目的

細胞密度は、健全な培養の維持、継代培養、細胞バンクの作成、フローサイトメトリーや ELISA 用のサンプルの準備、そして単に出版用の数値を追跡するために重要です。一方、生存率は本質的に培養の健全性のマーカーです。また、細胞毒性物質を投与すると、特定の時間枠内にどれだけの細胞が死滅するかを理解するための毒性試験にも役立ちます。
血球計数器の使用は他の分野にも拡大しています。現在、醸造では発酵中の酵母の密度と品質を評価するために、また蜂蜜生産では最終製品中の花粉の密度を決定する際に日常的に使用されています。また、技術の進歩により血球計数器も進化し、使い捨てチャンバーによる自動細胞計数が可能になり、ほぼ即座に結果が得られます。この新しいアプローチは、幅広い一般的な細胞株に対してかなりうまく機能します (そして、大量の時間を節約できます!) が、希少疾患の患者細胞などのよりカスタムなアプリケーションには微調整が必​​要な場合があります。


HemocyTap アプリ – 細胞数を集計し、自動的に計算します

血球計数器を使用した細胞計数は、非常に反復的で時間がかかる場合があります。特に、1 日に 10 ～ 20 個のサンプルを処理する必要がある場合は、生細胞をカウントし、その場ですべての細胞の計算を実行します。
HemocyTap は、細胞を集計し、毎日の計算を自動的に実行するために使用されるアプリです。生細胞と死細胞をカウントし、細胞密度、生存率、新しい培養量を計算し、データを保存して電子メールで送信し、経時的な変化をプロットします。このアプリの主な機能は次のとおりです。
2 つの集計カウンターを使用します。1 つは生細胞用、もう 1 つは死細胞用です。
2. それぞれが異なる音を発し、どのボタンを押すべきかを知らせます。
3. すべての正方形で数えたすべてのセルを記録します。
4. 顕微鏡で見える正方形を変更するのと同じ方法で、数えている正方形を変更します。
5. カウントしたいデフォルトの正方形を選択します。それらは強調表示されます。
6. 中央の正方形の内側にある大きな正方形を数えるか小さな正方形を数えるかを決定できます。
7. カウントの平均を計算します。
8.継代培養時に必要な細胞密度を得るためにどのくらいの量を追加すればよいかを示します
9. 細胞生存率と生細胞数を示します。
細胞計数の詳細情報または hemocyTap アプリのダウンロードについては、www.hemocytometer.org をご覧ください。
12th Nov 2024 Sana Riaz

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