フローサイトメトリー抗体

フローサイトメトリーは、細胞または粒子（細胞内タンパク質、ペプチド、DNA）の集団の物理的および化学的特性の両方を分析するために使用される実験手法です。 フローサイトメーター（FCまたはFCM）は、レーザービーム技術を利用して、不均一な細胞集団内の個々の細胞のサイズ、形状、および特性を評価します。 フローサイトメトリーは、特定のフローサイトメトリーソフトウェアプログラムを使用して詳細に分析できる定量的方法です。

フローサイトメトリーは、細胞の表面または細胞内のいずれかに発現する特定のマーカーの存在を検出するために使用できます。

まず、細胞懸濁液サンプルを調製し、フローサイトメーターに供給します。 流体力学的フォーカシングとして知られるメカニズムにより、フローサイトメーターは液体を使用して、細胞を単一細胞と同じ速度で移動させます。 流体力学的集束では、より速く移動するシース流体（生理食塩水など）を使用して、サンプルをより小さなコアストリーム（流体力学的コアと呼ばれる）に押し込み、すべての粒子がほぼ同じ速度で同じ軸に沿って移動するようにします。

サンプルが流体システムから解放されると、マルチプレックスレーザーモジュールから解放されたレーザービームを通って移動します。 次に、偏向された光は、いくつかの検出システムによって検出される。 出力データを分析することにより、細胞のサイズや複雑さ、その他の特性など、細胞集団の特徴を確立できます。

レーザービームからの光がサンプルを通過するとき、光のたわみがあります。この偏向された光は、検出器によって感知されます。これは、サンプル内のセルがどのように特徴付けられるかです。たとえば、セルのサイズが小さい場合、光は大きなセルよりも小さい角度で偏向されます。 1つの検出器は、レーザーのこの経路に沿った散乱光を測定します。この検出器は、前方散乱検出器として知られています。前方散乱（FSC）の測定により、サイズによる細胞の識別が可能になります。 FSC強度はセルの直径に比例し、主にセル周辺の光の回折によるものです。

さらに、細胞の複雑さはフローサイトメトリーによって分析することができます。たとえば、顆粒球（好中球など）などの細胞がレーザービームを通過すると、細胞の粒状性により、光がより大きな角度で偏向します。この場合の偏向光は、側方散乱（SSC）検出器によってピックアップされます。したがって、SSC強度は、セルの複雑さまたは粒度に比例します。

次に、FSCデータとSSCデータを組み合わせて、サンプル内の細胞/粒子を特徴付けます。検出器からのアナログ信号はデジタル信号に変換され、FlowJoなどの分析ソフトウェアを介して観察できます。

免疫表現型検査/蛍光による細胞選別-これはフローサイトメトリーの最も一般的な使用法の1つです。免疫表現型検査は、細胞、特に免疫細胞を検出し、特定の抗原の発現に基づいて分類する方法です。それぞれCD4およびCD8の発現に基づくTヘルパー細胞および細胞傷害性T細胞の分類。

サイズと複雑さによる細胞の分類-フローサイトメトリーを使用して、サンプル内の細胞のサイズ（前方散乱）と細胞の粒度（側方散乱）を分析できます。セルの粒度は、セルの内部の複雑さ、つまり細胞小器官の数に基づいています。結果を特定の細胞タイプの参照前方および側方散乱値と比較すると、サンプル内の細胞のタイプを特定できます。

細胞周期分析-フローサイトメトリーは、4つの異なる段階を測定できる蛍光色素を使用して、細胞が細胞周期のどの段階にあるかを評価するために使用できます。

細胞カウント/生存率分析-生細胞は、色素排除として知られている方法を使用して死細胞と区別することができます。この技術は、死んだ細胞や死にかけている細胞が色素を取り込むことができるのに対し、生きている細胞全体はできないという前提で機能します。アポトーシス細胞と壊死細胞の区別を可能にするのは、この蛍光色素の取り込みです。さらに、フローサイトメトリーは、細胞内の形態学的、生化学的および分子的変化を分析することにより、アポトーシス細胞と壊死細胞をさらに区別することができます。

細胞増殖-細胞増殖アッセイは、フローサイトメトリーのもう1つの一般的な使用法です。細胞増殖を分析するために、細胞集団の細胞膜を、カルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル（CFSE）として知られる蛍光色素で標識します。有糸分裂が起こると、色素の半分が各娘細胞に伝達されます。結果としての蛍光の減少は、増殖速度に比例します。

ポリクローナル抗体は、各抗体が同じ抗原の異なるエピトープに結合する抗体の混合物です。 ポリクローナルは、フローサイトメトリーによって特定の細胞表面マーカーを検出するための費用効果の高い方法です。 ただし、ポリクローナル抗体の制限は、バックグラウンドノイズが大きいことです。 これは、結合がモノクローナル抗体ほど特異的ではないためです。 モノクローナル抗体は、起源の1つのハイブリドーマ細胞のクローニングを介して合成されます。 これらのタイプの抗体は、抗原の同じエピトープに結合します。 このようにして、非特異的なバックグラウンドノイズが少なくなります。 したがって、実験の要件に応じて、モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体のいずれかを使用できます。