抗タグ抗体

ダイアグラム: Myc-tag抗体(CABE010)を使用してインキュベートした293T細胞で過剰発現したMyc-tagedタンパク質の免疫沈降。 モックはネガティブコントロールとして機能し、過剰発現した293T細胞ライセートはポジティブコントロールとして機能しました。

ダイアグラム: GFP-Tag抗体(CABE011)を使用したGFPトランスジェニック293T細胞の免疫蛍光分析。 緑:GFP発現。 青:核染色用のDAPI。

抗タグ抗体とは何ですか?

抗体タグは、タンパク質の構造に組み込まれたペプチド配列です。 それらはタンパク質のより簡単な検出と精製を容易にします。 タンパク質タグはタンパク質の機能を妨げないことが多く、プロテアーゼを使用すると簡単に取り除くことができます。 それらは、免疫染色技術(免疫細胞化学、免疫組織化学)を介してタンパク質の視覚化を可能にすることにより、検出目的に使用することができます。 それらはまた、細胞溶解物からのタンパク質の大規模な精製にも使用できます。


タンパク質タグの種類

プロテインタグ タイプ 説明 一般的なアプリケーション

GFP(緑色蛍光タンパク質)

フルオロフォア

クラゲAequoreavictoriaから分離されました。 青または紫外線(UV)光にさらされると緑色になります。

レポーターアッセイ、蛍光顕微鏡、タンパク質の共局在。 マクロ写真、トランスジェニック.

RFP(赤色蛍光タンパク質)

フルオロフォア

元のRFPはDiscosomaから分離され、DsRedという名前が付けられました。 励起すると赤橙色になります。

タンパク質局在化研究(検出)、タンパク質精製、光学イメージング。

T7(T7 RNAポリメラーゼ)

フルオロフォア

5 '→3'方向のDNAからのRNAの形成を触媒するT7バクテリオファージからのRNAポリメラーゼ。

タンパク質の検出と発現-多くの発現ベクターのタグ(T7 RNAポリメラーゼ発現システムに基づく)。

mCherry

フルオロフォア

単量体の赤色蛍光タンパク質のmFruitsファミリーのメンバー。 DiscosomaイソギンチャクのDsRedから派生。a

蛍光顕微鏡、長波長ヘテロFRET(蛍光共鳴エネルギー移動)、バクテリア標識。

DDDDK

フルオロフォア

親水性ポリペプチドタグ.

蛍光抗体法によるタンパク質の局在、SDS-Page。

HA

ペプチド

長さ98-106アミノ酸の血球凝集素に由来するタグ。 血球凝集素は、インフルエンザウイルスの表面に見られるクラスIの融合タンパク質です。

タンパク質の検出と精製、発現ベクターのエピトープタグ。

His

ペプチド

アミノ酸ヒスチジン由来のタグ。 長さは4〜10残基の間で変化し、最も一般的なHisタグは6残基の長さです(ヘキサヒスチジンタグ)。

タンパク質間相互作用の検出、結合アッセイによるタンパク質精製、蛍光顕微鏡(フルオロヒスチジンタグ)。

Myc

ペプチド

c-myc遺伝子産物に由来するタグ。

アフィニティークロマトグラフィー、蛍光抗体法によるセルライト局在化研究、ウエスタンブロッティングによるタンパク質検出。

GST(グルタチオン-S-トランスフェラーゼ)

ポリペプチド

220アミノ酸(約26kDa)からなる大きなタグ。

プルダウンアッセイによるタンパク質精製。

TAP(抗原処理関連トランスポーター)

ポリペプチド

黄色ブドウ球菌の表面タンパク質であるプロテインAとカルモジュリン結合ペプチド(CBP)の2つの免疫グロブリンG(IgG)結合ドメインで構成されています。

プロテインAアフィニティークロマトグラフィーによるタンパク質精製。

Trx(チオレドキシン)

ポリペプチド

チオレドキシンは通常、酸化されたシステイン残基の還元とジスルフィド結合の切断に関与しています。 可溶化タグとして使用されます。

タンパク質の折り畳みを支援し、タグ付きタンパク質の溶解性を向上させます。

V5

ポリペプチド

短いエピトープタグの長さは約14アミノ酸です。

タンパク質の検出と精製。

MBP(マルトース結合タンパク質)

ポリペプチド

マルトデキストリンの取り込みと効率的な異化作用に関与するE.Coliで発現するタンパク質タグ。 長さ約42.5kDa

アフィニティークロマトグラフィーによるタンパク質精製。


タンパク質タグの利点

  • タンパク質タグは、多くの場合、タンパク質の溶解性を向上させることができます-不溶性タンパク質を可溶性にすることができます。
    細胞内のタンパク質の局在を研究するために使用できます(蛍光タグ)。
    タグがないと精製が難しいタンパク質の精製を容易にします。
    類似のタンパク質を互いに区別するために使用できます。
    タグは、取り付けられているのと同じくらい簡単に取り外すことができます。プロテアーゼを使用してタンパク質タグを取り除くことができます。 プロテアーゼ処理は簡単なテクニックです。
    より高度な精製のために、タンパク質は複数のタグでタグ付けされる場合があります。 プロセスでより多くの精製ステップを行うと、より純度の高い製品が得られます。

タンパク質タグ抗体は何に使用されますか?

抗体は、特定のタンパク質タグに対して特異的に作成できます。 抗タグ抗体は、モノクローナルまたはポリクローナルであり得、タグを有するタンパク質を検出および/または精製するために使用され得る。

検出

  • ウエスタンブロット
    免疫沈降(IP)/共免疫沈降(Co-IP)
    免疫染色(免疫細胞化学(ICC)
    免疫組織化学(IHC)

精製

  • アフィニティークロマトグラフィー

タンパク質タグ抗体の利点

  • タンパク質タグ抗体は、標的タンパク質に利用できる抗体がない場合に非常に役立ちます。


    標的タンパク質に対する抗体が正確な結果を提供するのに十分に特異的でない場合に役立ちます。 抗タグ抗体は、通常、哺乳類細胞ではなく、大腸菌やウイルスなどの発現系で合成されるため、特異性が高く、非反応性があります。


    同じ抗タグ抗体を使用して、同じタグを持つ広範囲のタンパク質を精製することができます。


売れ筋のプロテインタグ抗体